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蛋白质印迹实验一检测

发布时间:2018-11-15 10:34:01 阅读量:164次



试剂、试剂盒
实验步骤
电泳转移后,小心地从固定化材料上剥离凝胶。如果有小块凝胶留在膜上,用双蒸水洗,然后用湿的软棉花擦去凝胶,残留在膜上的凝胶会导致染色后在膜上出现 “白点”。膜可以贮存,也可以立即染色或用其他方式检测。大部分用于电泳的染色方法都可用于膜。主要的限制是背景染色。印度黑染色很灵敏,可达 100 ng,而且只有很弱的背景。氨基黑染色背景也很弱,染色时间只要 1 小时,灵敏度为 1.5 μg,可同时用于凝胶和膜。

如将干膜染色,首先应该将膜放在水中,否则高浓度的甲醇会将膜弄扭曲,甚至溶解。如果转移后在 Denhardt 试剂或牛血清白蛋白中温育,能得到较好的结果,但背景也较高。使用放射性标记蛋白时,应该先干燥膜再做放射自显影。

Heukeshoven 等对超薄聚丙烯酰胺凝胶的印迹材料,印迹方法和各种显色方法,如印度黑染色、银染、金染等作了全面的综述。